PCR en temps réel
La PCR est la première méthode qui permet de copier in vitro des segments de la molécule d’ADN spécifiques. Les réactifs chimiques de l’essai PCR, contenus dans un petit tube à essai, sont la paire d’amorces cible-spécifiques, un tampon de réaction approprié, l’ADN polymérase, les nucléotides et l’ajoute d’une template cible.
Le procédé implique des cycles répétés de chauffage et refroidissement à des températures définies, pendant certains intervalles de temps. Au cours de ce processus répété, température- dépendant, les amorces libres s’alignent et se lient à l’ADN template et, à travers l’ADN polymérase, les nucléotides libres sont incorporés dans une chaîne nucléotidique croissante, avec le but d’obtenir une copie identique de la molécule d’ADN, complémentaire au template original. L’ensemble du processus PCR implique généralement 35-45 cycles d’amplification dans un laps de temps d’environ deux heures ou moins. Le procédé de PCR est effectué par un dispositif de chauffage et de refroidissement automatique appelé thermocycleur, autrement connu sous le nom « machine PCR ».
Une version plus avancée de PCR, appelée PCR en temps réel, a été introduite avec l’ajoute d’une sonde fluorescente. La sonde supplémentaire confère une ultérieure spécificité au processus d’amplification, mais génère également un signal détectable, qui peut être capturé par une unité de détection de la fluorescence. Etant donné que la quantité de fluorescence émise est proportionnelle à l’amplicon, le procédé basé sur la fluorescence fournit le moyen de quantifier la quantité d’ADN amplifié. Le signal fluorescent peut être capturé pendant et après chaque cycle d’amplification de sorte que l’analyste peut observer l’amplification de l’ADN en temps réel, d’où le nom donné à ce processus.
La PCR en temps réel a ouvert à des nouvelles possibilités de contrôle de la qualité des denrées alimentaires, en termes de portée et rapidité de l’analyse, des coûts totaux de l’analyse et de fiabilité des résultats.
